綜合輔導(dǎo)藥分：色譜法

第七章 色譜法第一節(jié) 概述色譜法：是一種物理或物理化學(xué)分離方法。用于定性鑒別、純度檢查、含量測(cè)定。分配系數(shù)：組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配平衡時(shí)的濃度之比。 K=容量因子：又稱質(zhì)量分配系數(shù)，即達(dá)到分配平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相中的質(zhì)量之比。 第二節(jié) 薄層分析法一般指吸附薄層色譜法，固定相為吸附劑的薄層吸附法。K值越大隨展開劑移動(dòng)的速度越慢。比移徝：在薄層色譜法中，組分的遷移距離( )與展開劑的遷移距離( )之比稱為比移值( ) 。 R 最佳范圍是0.3-0.5 ，可用范圍是0.2-0.8 。吸附劑：吸附薄層色譜法的固定相。常用吸附劑有：硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素和聚酰胺。 硅膠：在105-110 C加熱30分，使硅膠吸附力增加，稱為活化。具微酸性，適分離酸性中性物質(zhì)。 氧化鋁：堿性、中性、酸性。中性用得多。制備薄層板：要求吸附劑涂布均勻表面光滑，使用前檢查均勻度。2000版用機(jī)械涂布法。活化。吸附劑與展開劑的選擇：分離極性較強(qiáng)的組分時(shí)，宜選用活性低(活度級(jí)別高)的薄層板，以極性強(qiáng)的展開劑展開。反之點(diǎn)樣：體積宜在20ul 以下，樣徑不超過2-3mm ，點(diǎn)間距離為1.5-2.0cm，距底2.0cm 。顯色方法：直接噴霧法、浸漬法、壓板法。 定性分析方法、純度檢查、定量分析方法(洗脫測(cè)定法和直接測(cè)定法)。第三節(jié) 氣相色譜法氣相色譜法：以氣體為流動(dòng)相的色譜法稱為氣相色譜法。不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。原理：各組分在固定相與載氣(流動(dòng)相)間分配系數(shù)不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。一、基本原理：(一)、基本概念：一個(gè)組分的色譜峰用三項(xiàng)參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)、峰位(用保留值表示，用于定性)、峰寬(用于衡量柱效)。(1)、保留時(shí)間 (tR) ：從進(jìn)樣開始到某個(gè)組分的色譜峰頂點(diǎn)的時(shí)間間隔。(2)、死時(shí)間 (t0)：分配系數(shù)為零的組分的保留時(shí)間。(3)、相對(duì)保留值 (r)：兩組分的調(diào)整保留值之比。(4)、半峰寬 (Wh/2)：峰高一半處的峰寬。(二)、塔板理論： 塔板理論方程式(高斯方程式)： 理論塔板式數(shù)： 理論塔板高度：(三)、速率理論： H=A+B/u+Cu 影響塔板高度的因素：1、渦流擴(kuò)散 2、縱向擴(kuò)散 3、傳質(zhì)阻抗二、氣相色譜儀：(1)、色譜柱：固定相與柱管組成。 填充柱、毛細(xì)管柱； 分配柱、吸附柱(2)、固定液：高沸點(diǎn)的液體，操作下為液態(tài)。 甲基硅油、聚乙二醇等 選擇原則：按相似性、按主要差別、按麥?zhǔn)喜顒e選擇。(3)、載體：化學(xué)惰性的多孔性微粒 (4)、毛細(xì)管色譜柱：開管型、填充型(5)、檢測(cè)器：1、濃度型檢測(cè)器：熱導(dǎo)檢測(cè)器和電子捕獲檢測(cè)器 2、質(zhì)量型檢測(cè)器：氫焰離子化檢測(cè)器 中國(guó)藥典2000對(duì)氣相色譜規(guī)定：除檢測(cè)器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意更改外，其他均可適當(dāng)改變，色譜圖于30min內(nèi)記錄完畢。第四節(jié) 高效液相色譜法1、 基本原理：影響柱效的主要因素是渦流擴(kuò)散和傳質(zhì)阻抗。分類：1、液固吸附色譜法：流動(dòng)相為液體，固定相是固體吸附劑。 2、液--液分配色譜法：固定相幾乎全是化學(xué)鍵合硅膠，又稱化學(xué)鍵合相色譜法。按固定相和流動(dòng)相的極性2又分：正相色譜法和反相色譜相色譜法：流動(dòng)相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機(jī)溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團(tuán)物質(zhì)的分離。 極性弱組分先流出反相色譜法：……………大于……………………… 用于分離非極性至中等極性的分子型化合物2、 高效液相色譜儀：1、高壓輸液泵 2、色譜柱 3、進(jìn)樣閥 4、檢測(cè)器：紫外吸收檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、差示折光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè) 中國(guó)藥典2000對(duì)高效液相色譜法規(guī)定：除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意更改外，其余均可適當(dāng)改變，色譜圖于20min內(nèi)記錄完畢。第5節(jié) 色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)和定量分析方法一、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)1、 色譜柱的理論板數(shù)：2、 分離度：應(yīng)大于1.5 3、重復(fù)性3、 拖尾聲因子：0.95-1.05之間二、定量測(cè)定法：1、內(nèi)標(biāo)法加較正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量2、外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量3、加較正因子的主成分自身對(duì)照法不加較正因子的主成分自身對(duì)照法第六節(jié) 電泳法電泳法：在電場(chǎng)的作用下，依據(jù)各組分之間淌度的不同實(shí)現(xiàn)分離的方法。分離程度取決于淌度之差。一、基本原理： 電泳遷移速度為：電泳淌度：電場(chǎng)強(qiáng)度 影響電泳分離的條件：1、緩沖液的PH值和離子強(qiáng)度 2、電場(chǎng)強(qiáng)度 3、樣品濃度二、電泳儀：3、 各類電泳法：(1)、紙電泳法 (2)、醋酸纖維素電泳法：主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)百分含量(3)、瓊脂糖凝膠電泳法： (4)、聚丙烯酰胺凝膠電泳法(5)、SDS聚丙烯胺凝膠電泳法：測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量四、毛細(xì)管電泳法簡(jiǎn)介：以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的分析方法。